Pemeriksaan Kadar Hemoglobin Metode Cyanmeth

Prinsip                           :

Hemoglobin oleh K₃Fe(CN)₆ akan diubah menjadi methemoglobin yang kemudian oleh KCN akan diubah menjadi hemoglobinsianida (HICN). Penambahan KH₂PO₄ bertujuan untuk mengatur pH larutan, sedang penambahan ’’non isotonik detergent’’ bertujuan untuk mempercepat lisisnya eritrosit dan mengurangi kekeruhan HICN yang terjadi. Intensitas warna yang terbentuk diukur serapannya dengan photometer pada panjang gelombang 540 nm.

Alat-alat                         :

1. Tabung reaksi

2. Pipet automatik 20 ul.

3. Pipet semi automatik (dispenser) 5 ml.

4. Photometer clinikon 4010.

Bahan                             :

Darah dengan antikoagulan K₂EDTA.

Reagen                           :

Reagen sianida dengan komposisi:

-       K₃Fe(CN)₆                             : 200 mg

-       KCN                                      : 50 mg

-       KH₂PO₄                                 : 140 mg

-       Non isotonik detergent             : 0,5 – 1 ml

-       Aquadest                                : 0,5 – 1 ml

-       Standatr HICN yang memiliki kadar masing-masing : 27,1 mg/dl, 59,1 mg/dl, 78,6 mg/dl, 228,5 mg/dl.

Pembuatan Kurva Standart :

1. Pipet kedalam 4 buah tabung reaksi masing – masing 5 ml larutan reagen sianida.
2. Ditambahkan 20 ul larutan standart HICN yang dimiliki kadar masing – masing  27,1; 59,1; 78,6; 228,5 mg/dl.
3. Dicampur sampai homogen, diamkan selama 3 menit.
4. Dibaca serapannya dengan photometer pada panjang gelombang 540 nm dengan larutan sianida sebagai blanko.
5. Hasil serapan yang didapat diperhitungkan terhadap konsentrasi standart sehingga didapat faktor ( f ).

Pemeriksaan kadar HB     :

1.    Dipepet 5 ml reagen sianida kedalam tabung reaksi.

2.    Ditambahkan 20 ul darah K₂EDTA sampel, campur sampai homogen, didiamkan selama 3 menit.

3.    Dibaca serapannya dengan photometer pada panjang gelobang 540 nm dengan larutan sianida sebagai blanko.

4.    Hasil serapan yang didapat dihitung dengan dikalikan faktor yang didapat.

Hasil perhitungan              :

Serapan standart HICN      :

Kadar standart HB ( g/dl )	Serapan standart
6.8	0.159
14.8	0.320
19.8	0.510
57.4	1.525
98.79	2.514

                        Kadar standart HB               98.79

Faktor = ------------------------------------  = ------------  = 39.3

            Serapan standart                 2.514

Serapan sample                 :

Sempel  I = 0.350

Sempel II = 0.345

Hasil HB sempel                 :

                 

  0.350 + 0.345

HB = --------------------------  X     39.3             =         13.6 g/dl

                      2

Pembahasan                       :

Nilai normal Hemoglobin untuk :

Pria                 : 13 – 18 g/dl

Wanita           : 12 – 16 g /dl

Kesimpulan                                     :

Kadar HB sempel tersebut normal.

Daftar Pustaka                    :

Pemeriksaan Laboratorium Hematologi Sederhana : FKUI 1996.